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Amenazas del exterior I: un virus de vid peligroso (Autora: A.B. Ruiz-García)

Existen virus de vid no presentes en España que por su agresividad y sintomatología suponen un riesgo y amenaza para nuestra viticultura.
Entre ellos está un Badnavirus, un virus de DNA, que se denomina grapevine vein clearing virus. Ha sido el primer virus de DNA descrito en vid (familia Caulimoviridae, género Badnavirus), que produce el síndrome de decaimiento y aclaramiento de las nervaduras y que ha sido descrito en los estados de Missouri, Illinois e Indiana (EEUU).

El protocolo para su detección por PCR convencional es el siguiente:

Muestreo: 4 brotes terminales (10 cm) alrededor de la cepa

Purificación de ácidos nucleicos: DNeasy Plant kit o similar

Preparación del cóctel: Para cada reacción de 25 microlitros (3 microlitros de DNA purificado)

H2O 10,8 microlitros
Tampón 5x Promega 5 microlitros
Cl2Mg 25 mM (uso 1,5 mM) 1,5 microlitros
dNTP (2,5 mM cada uno) uso 0,25 mM 2,5 microlitros
GVCV-F1 (25 microM) uso 1microM 1 microlitro
GVCV-R1 (25 microM) uso 1microM 1 microlitros
GoTaq G2 Promega (5 U/microlitro) 0,2 microlitros

ORF3 (530pb)

GVCV-F1 5′-CACGTTTCAAAGAAAGATGGAC-3′ (Zhang et al.)
GVCV-R1 5′-ATCCKTCCATGCAWCCGTCAG-3′ (Zhang et al.)


Condiciones del Termociclador

4 min ------------------- 94ºC
40 ciclos: 30 s ---------------------- 92ºC
30 s ---------------------- 50ºC
1 min -------------------- 72ºC
10 min ----------------- 72ºC

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