Continuado con las amenazas de virus que pueden proceder de países terceros nos encontramos con otro virus de DNA. En esta ocasión es geminivirus, llamado grapevine cabernet franc associated virus (GCFaV), también llamado Grapevine red blotch associated virus (GRBaV) (familia Geminiviridae), que produce una reducción de azúcares y pérdida importante en la calidad de los vinos. Este patógeno ha sido descrito en los estados de California y Nueva York (EEUU).

Es importante conocer cómo poder detectarlo en material vegetal por PCR, por lo que abajo hay un protocolo de PCR para su diagnóstico.

Muestreo: 4 brotes terminales (10 cm) alrededor de la cepa

Purificación de ácidos nucleicos: DNeasy Plant kit o similar

Preparación del cóctel: Para cada reacción de 25 microlitros (3 microlitros de DNA purificado)
H2O 10,8 microlitros
Tampón 5x Promega 5 microlitros
Cl2Mg 25 mM (uso 1,5 mM) 1,5 microlitros
dNTP (2,5 mM cada uno) uso 0,25 mM 2,5 microlitros
GVCV-F1 (25 microM) uso 1microM 1 microlitro
GVCV-R1 (25 microM) uso 1microM 1 microlitro
GoTaq G2 Promega (5 U/microlitros) 0,2 microlitros

ORF1 (557pb)
GVGF1 5′-CTCGTCGCATTTGTAAGA-3′ (Al Rwahnih et al.)
GVGR1 5′-ACTGACAAGGCCTACTACG-3′ (Al Rwahnih et al.)


Condiciones del Termociclador
4 min ------------------- 94ºC
40 ciclos: 30 s ---------------------- 92ºC
30 s ---------------------- 50ºC
1 min -------------------- 72ºC
10 min ----------------- 72ºC